نوع مقاله : مقاله پژوهشی
نویسندگان
1 استادیار گروه دندانپزشکی کودکان، دانشکده دندانپزشکی، دانشگاه علوم پزشکی رفسنجان
2 دانشیار گروه دندانپزشکی کودکان، دانشکده دندانپزشکی، دانشگاه علوم پزشکی رفسنجان
3 کارشناس گروه میکروب شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی رفسنجان
4 کارشناس ارشد علوم کامپیوتر
چکیده
کلیدواژهها
عنوان مقاله [English]
نویسندگان [English]
Introduction: The antiseptic characteristic of root canal filling materials seems very critical in pulpectomy procedure to eliminate residual pathogens of root canals. The aim of this laboratory study was to compare the antibacterial activity of a newly introduced premixed calcium hydroxide root canal filling paste of deciduous teeth (Diapaste) with Zinc Oxide-Eugenol (ZOE) and Sealapex on Enterococcus faecalis.
Materials & Methods: In this study, agar diffusion inhibitory test was used to assess antibacterial activity. Ten 10-cm-diameter dishes with 4.0mm thickness of agar inoculated with Enterococcus faecalis were used and four 5-mm-diameter wells per dish at equidistant points were filled with the three test root canal filling materials (Diapaste, ZOE and Sealapex) and distilled water as a negative control was used to fill the fourth well. After incubation of the plates at 37oC for 48 hours, the diameter of the zones of bacterial growth inhibition produced around the wells was measured (in mm) with a caliper. Data were analyzed by Kruskall-Wallis test and Mann-Whitney U test.
Results: Kruskall-Wallis test indicated that there were statistically significant differences (P<0.001) among median of the zones of bacterial growth inhibition produced by the three different materials. Mean diameter of inhibition zones of bacterial growth was significantly higher in Diapaste than Sealapex (P<0.001) and ZOE (P<0.001).
Conclusion: With respect to the limitations of an in vitro study, it appears that Diapaste has more antibacterial activity than ZOE and Sealapex.
کلیدواژهها [English]
مقدمه
پوسیدگی دندان و تروما دو عامل اصلی درگیری پالپ دندانهای شیری میباشند. علیرغم پیشرفتهای نوین در پیشگیری از پوسیدگی دندانی و افزایش درک اهمیت نگهداری دندانهای شیری، هنوز هم بسیاری از دندانها، زودتر از موقع از دست میروند. حفظ دندانهای شیری جهت جلوگیری از مالاکلوژن، مشکلات زیبایی، تکلمی یا فانکشنال ضروری به نظر میرسد. درمان پالپکتومی برای دندانهای با شواهد التهاب غیرقابل برگشت یا نکروز پالپ ریشهای با ساپورت استخوانی مناسب تجویز میشود و هدف آن، حفظ دندانهای شیری است که در غیر این صورت از دست میروند.(2و1)
عفونت کانال ریشه دندانهای شیری طبیعت پلیمیکروبیال داشته و باکتریهای بیهوازی گونه غالب آن میباشند. این میکروارگانیسمها در طول کانال ریشه منتشر شده و پالپکتومی با هدف حذف نسوج آلوده به آنها انجام میگردد؛(3) با این وجود چون این میکروارگانیسمها ممکن است حتی پس از آمادهسازی بیومکانیکی کانالها و کاربرد مواد شوینده، داخل کانالها باقی بمانند، مواد پرکننده کانال باید توانایی حذف پاتوژنهای باقیمانده و خنثی کردن محصولات سمی آنها و جلوگیری از عفونت مجدد کانال را داشته باشند؛ بنابراین فعالیت ضدمیکروبی مواد پرکننده کانال بسیار مهم و ضروری بنظر میرسد.(4و3)
انتروکوک فکالیس یکی از باکتریهای مقاوم پس از درمان کانال ریشه دندانهای شیری و دائمی است و مطالعات متعدد نشان دادهاند که این باکتری یکی از شایعترین گونههای جدا شده از دندانهای عفونی یا درمان ریشه شده است.(8-5)
روشهای مختلفی جهت ارزیابی خاصیت ضدباکتریایی مواد پرکننده کانال دندان استفاده شدهاند که شایعترین آنها تست مهاری انتشار در آگار (Agar Diffusion Inhibitory Test)، تست تماس مستقیم (Direct Contact Test) و تست نفوذ در توبول عاجی (Dentinal tubule penetrating test) میباشند. علیرغم محدودیتهایی که تست مهاری انتشار در آگار دارد، این روش به دلیل سهولت بیشتر در انجام کار، شایعترین تکنیک مورد استفاده در گذشته و حال بوده است.(11-9)
خمیر زینک اکساید اوژنول (ZOE)، خمیرهای با بیس یدوفرم و خمیرهای با بیس کلسیم هیدروکساید سه دسته اصلی مواد مورد استفاده جهت پرکردن کانال ریشه دندانهای شیری میباشند که از بین آنها خمیر زینکاکساید اوژنول، شایعترین ماده مورد استفاده جهت پرکردن ریشه دندانهای شیری در آمریکا میباشد.(12) باتوجه به اثر ضدباکتریایی اندک زینک اکساید اوژنول و سرعت جذب کندتر آن در مقایسه با ریشه دندانهای شیری(14و13)، ایدهآل بودن این ماده به عنوان یک پرکننده کانال در دندانهای شیری زیر سوال رفته است و جستجو برای یافتن مادهای ایدهآلتر و با خواص ضدمیکروبی بیشتر ادامه دارد.(1)
خواص ضدمیکروبی مواد با بیس کلسیم هیدروکساید ناشی از تجزیه این ماده به دو یون هیدروکسیل و کلسیم و فراهم نمودن شرایط قلیایی در محیط پیرامونی میباشد و هر چه این مواد محلولتر در آب باشند با سهولت بیشتری به این دو یون تجزیه میگردند.(15) Diapaste یک خمیر از پیش آماده با بیس کلسیم هیدروکساید است که جدیداً وارد بازار گردیده و احتمال میرود که به واسطه خاصیت محلول در آب بودنش بتواند اثر ضدمیکروبی بهتری از خود به نمایش بگذارد.(16) Sealapex یک سمان نامحلول در آب با بیس کلسیم هیدروکساید میباشد که در مطالعات متعدد اثر ضدباکتریایی متفاوتی برای آن گزارش شده است.(19-17)
لذا هدف از این مطالعه، مقایسه آزمایشگاهی فعالیت ضدباکتریایی خمیر Diapaste با خمیر زینک اکساید اوژنـول و سـمان Sealapex بـر روی باکتری انتـروکوک فکالیس بود.
مواد و روشها
جهت انجام این مطالعه آزمایشگاهی، باکتری انتروکوک فکالیس به صورت ویالهای لیوفلیزه از مرکز پژوهشهای علمی و صنعتی ایران با PTCC: 1394 تهیه شده و بعد از شکستن ویال به داخل محیط مایع Brain (Heart Infusion Broth (Merck, Darmstadt, Germany ریخته شده و به مدت 48 ساعت در دمای 37 درجه سانتی گراد انکوبه گردید. پس از آن بر روی محیط جامد Triptic Soy Agar (Merck) به مدت 48 ساعت برای ایجاد کلونی کشت داده شد. سپس با استفاده از این کلونیها و با کمک سرم فیزیولوژی، سوسپانسیونی با غلظت تقریبی 5/0 واحد مک فارلند (1/5×108 cells/mL) تهیه گردید که غلظت آن بااسپکتروفوتومتر (Sartoriuste, Goettingen, Germany) مورد تایید قرار گرفت. برای تهیه محیط کشت آگار حاوی باکتری، محیط MullerHinton Agar (Merck) را حرارت داده و زمانی که دمای آن به 50-45 درجه سانتیگراد رسیده و مایع گردید به آن cc1 از سوسپانسیون حاوی باکتری اضافه شد. سپس این ترکیب داخل 10 پلیت یک بار مصرف استریل به قطر cm10 به گونهای ریخته شد که آگار ضخامتی چهار میلیمتری پیدا نمود. پس از سرد شدن مخلوط، در هر ظرف توسط پانچ استریل، چهار حفره با فواصل یکسان از هم و به قطر پنج میلیمتر در آگار ایجاد گردید. در هر کدام از حفرات یک پلیت بترتیب Zinc oxide eugenol (ZOE) (Sultan, Englewood, NJ, USA)، Diapaste (DiaDent, Choongchong Buk-do, Korea)و Sealapex (Kerr, Salerno, Italy) با وزن یکسان که با استفاده از ترازوی دیجیتال (Genova Diagnostics, New Malden, UK) به دست آمده بود، ریخته شد. برای تهیه خمیر ZOE و Sealapex مطابق دستورالعمل کارخانه سازنده عمل گردید. به عنوان کنترل منفی، در حفره چهارم پلیت آب مقطر ریخته شد. سپس پلیتها در دمای 37 درجه سانتیگراد در انکوباتور (Gallenkamp, Loughborough, UK) انکوبه شده و پس از 48 ساعت با استفاده از کولیس، قطر منطقه مهار رشد مربوط به هر ماده بر حسب میلیمتر اندازهگیری شد. نمونهای از هالههای عدم رشد در اطراف مواد مورد آزمایش در یک پلیت در تصویر 1 نشان داده شده است. یافتههای حاصل از هر نمونه در چک لیست مربوطه ثبت و سپس وارد نرمافزار آماری SPSS با ویرایش 17 گردیدند و با آزمونهای Kruskal-Wallis و Mann-Whitney مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفتند. از آن جایی که واریانس قطر هاله عدم رشد باکتری در مواد پرکننده کانال مورد بررسی، بر طبق آزمون لون (Levene's Test) اختلاف معنیداری با یکدیگر داشتند (010/0P=)، لذا شرایط انجام آزمون ANOVA یک طرفه به منظور مقایسه میانگین قطر هاله عدم رشد برقرار نبود و بنابراین از آزمون ناپارامتری معادل Kruskal-Wallis به منظور مقایسه میانه قطر هاله عدم رشد در مواد پرکننده کانال مورد بررسی، استفاده گردید.
یافتهها
در تمام گروههای مورد آزمایش، منطقه عدم رشد باکتری دیده شد در حالی که در گروه کنترل منفی (آب مقطر) هیچ هاله عدم رشدی مشاهده نگردید. از گروه کنترل منفی (آب مقطر) صرفاً به منظور تأیید وجود باکتری انتروکوک فکالیس در محیط کشت، استفاده شد و هدف از آوردن این گروه، مقایسه با سایر گروهها نبود.
با استفاده از آزمون ناپارامتری Kruskal-Wallis، میانه مواد پرکننده کانال مورد بررسی اختلاف معنیداری با یکدیگر نشان دادند (جدول 1). به طوری که Diapaste بیشترین و ZOE کمترین قطر را داشتند.
همچنین با کاربرد آزمون منویتنی مشخص گردید که میانه قطر هاله عدم رشد در تمام زوج سیلرهای مورد بررسی با در نظر گرفتن اصلاح بن-فرنی از نظر آماری اختلاف معنیداری داشتند (جدول 2).
تصویر 1 : هاله عدم رشد باکتری در مواد مورد آزمایش (1: آب مقطر، 2: Sealapex، 3: ZOE، 4: Diapaste)
جدول 1 : میانه، چارک اول و سوم قطر هاله عدم رشد در مواد پرکننده کانال مورد بررسی
نام سیلر |
تعداد |
انحراف معیار ± میانگین |
(چارک سوم- چارک اول) میانه (mm) |
Kruskall-Wallis |
P-value |
ZOE |
10 |
12/0 ± 07/10 |
(16/10 - 99/9) 05/10 |
735/25 |
001/0 > |
Sealapex |
10 |
57/0 ± 99/11 |
(38/12 - 61/11) 78/11 |
||
Diapaste |
10 |
32/0 ± 90/13 |
(18/14 - 75/13) 90/13 |
جدول 2 : مقایسه میانه قطر هاله عدم رشد در هر یک از زوج مواد پرکننده کانال مورد بررسی
نام سیلر |
تعداد |
(چارک سوم- چارک اول) میانه |
Z |
P-value |
ZOE |
10 |
(16/10 – 99/9) 05/10 |
791/3-
|
001/0 > |
Diapaste |
10 |
(18/14- 75/13) 90/13 |
||
Diapaste |
10 |
(18/14- 75/13) 90/13 |
749/3- |
001/0 > |
Sealapex |
10 |
(38/12- 61/11) 78/11 |
||
ZOE |
10 |
(16/10 – 99/9) 05/10 |
788/3- |
001/0 > |
Sealapex |
10 |
(38/12- 61/11) 78/11 |
بحث
علیرغم افزایش اقدامات پیشگیرانه برای جلوگیری از پوسیدگی دندانها در دهههای اخیر نظیر استفاده از فلوراید و فیشورسیلانت، پوسیدگی دندانهای شیری که به درگیری پالپ دندان منجر میگردند همچنان به عنوان یک مشکل سلامت وجود دارد. در راستای حفظ این دندانها، درمان پالپ به صورت گستردهای در کودکان مورد تجویز قرار میگیرد.(12) به دلیل مورفولوژی پیچیده کانال ریشه در دندانهای شیری، پاکسازی کامل کانالها به روش مکانیکی امکانپذیر نمیباشد. بدین سبب جهت افزایش موفقیت درمان، از مواد با خاصیت ضدمیکروبی جهت پرکردن کانالها استفاده میشود.(21و20)
یافتههای حاصل از این مطالعه نشان داد که خمیر Diapaste خاصیت ضدباکتریایی بیشتری را نسبت به Sealapex و ZOE دارا میباشد. مواد پرکننده کانال با بیس کلسیم هیدروکساید، با آزاد سازی یون هیدروکسیل، خاصیت ضدباکتریایی از خود نشان میدهند. یون هیدروکسیل، باعث دناتوره شدن پروتئینها و تخریب DNA باکتری میگردد. همچنین pH قلیایی این مواد میتواند آنزیمهای غشاء سلولی باکتریها را غیرفعال کند و باعث مرگ باکتری شود.(20و15) از آنجایی که خمیر Diapaste و سمان Sealapex هر دو بیس کلسیم هیدروکساید دارند، شاید بتوان بالاتر بودن خاصیت ضدباکتریایی Diapaste را به حلالیت بیشتر این ماده در آب نسبت داد که با سهولت بیشتری در محیط آگار حرکت نموده و تاثیر ضدمیکروبی خود را ایفا مینماید. با توجه به اینکه در داخل کانال ریشه، توبولهای عاجی و کانالهای فرعی هم مقداری رطوبت به دنبال آمادهسازی و شستشوی کانالها باقی میماند شاید بتوان گفت که حلال بودن ماده پرکننده کانال در آب در شرایط طبیعی دندانها هم به لحاظ ایفای اثر ضدباکتریایی آن مفید فایده باشد. اگرچه که در شرایط محیط دهان شاید این حلالیت به پاک شدن زودتر از موعد این خمیر از کانال ریشه منجر گردد. Diapaste که خمیر از پیش آماده شدهای میباشد، با توجه به عدم نیاز به مخلوط نمودن نیز منجر به صرفهجویی زمانی در پروسه پالپکتومی میگردد. همچنین از لحاظ قیمت به صرفه میباشد.(16)
در مطالعه حاضر، مواد با بیس کلسیم هیدروکساید (Diapaste و Sealapex) خاصیت ضدباکتریایی بیشتری نسبت به ZOE نشان دادند. مطالعات گذشته نشان دادهاند که ZOE خاصیت ضدباکتریایی ضعیفی دارد و سرعت جذب آن در مقایسه با ریشه دندانهای شیری کندتر است.(20)
Queiroz و همکاران(3) در مطالعه خود که به منظور مقایسه خاصیت ضدباکتریایی مواد پرکننده کانال دندان انجام دادند، مشاهده نمودند که ZOE خاصیت ضدباکتریایی قویتری نسبت به Sealapex دارد؛ در حالی که در مطالعه حاضر خاصیت ضدباکتریایی Sealapex بیشتر از ZOE بود. از آنجایی که در هر دو مطالعه، جهت بررسی خاصیت ضدباکتریایی مواد پرکننده کانال، از روش Agar diffusion استفاده شده است شاید بتوان علت تفاوت در نتایج را به محدودیتهای این روش نسبت داد. قطر هاله عدم رشد در این تکنیک میزان دقیق خاصیت ضدباکتریایی مواد را نشان نمیدهد، زیرا میتواند تحت تاثیر حلالیت و دانسیته مواد مورد بررسی مدت زمان انکوباسیون پلیتها و شرایط محیط از جمله دمای محیط قرار گیرد. با وجودی که روش Agar diffusion به دلیل سهولت کاربرد شایعترین تکنیک کاربردی میباشد، جهت تعمیم نتایج آن به شرایط کلینیکی باید محدودیتهای این تکنیک را مدنظر قرار داد. به طور مثال در این تکنیک نمیتوان باکتریسید بودن یا باکتریوستاتیک بودن مواد را تعیین نمود. قابلیت زیست و حیات میکروارگانیسمها در این تکنیک قابل بررسی و مقایسه نمیباشد. همچنین جهت به دست آوردن نتایج دقیق، نیاز به استاندارد کردن و کنترل فاکتورهای بسیاری است.(9) از محدودیتهای مطالعه حاضر، استفاده از تنها یک تکنیک (Agar diffusion) جهت تعیین میزان خاصیت ضدباکتریایی مواد بود. لذا توصیه میشود در مطالعات آینده از چند روش متفاوت استفاده گردد و همچنین قطر هاله عدم رشد مواد در چند بازه زمانی اندازهگیری شده و اثر ضدمیکروبی این مواد بر روی میکروارگانیسمهای دیگری که احتمال باقی ماندن آنها پس از درمان اندودانتیکس وجود دارد، نیز بررسی گردد.
نتیجه گیری
با در نظر گرفتن محدودیتهای یک مطالعه آزمایشگاهی، به نظر میرسد خاصیت ضدباکتریایی Diapaste بیشتر از Sealapex و ZOE است و شاید بتواند به عنوان یک ماده جایگزین مناسب برای پرکردن کانال ریشه دندانهای شیری معرفی گردد.
تشکر و قدردانی
بدین وسیله از زحمات معاونت محترم پژوهشی دانشگاه علوم پزشکی رفسنجانجهت تامین هزینههای این طرح تقدیر و تشکر میگردد.